技术原理
基于活性的蛋白质组分析（Activity-Based Protein Profiling，ABPP）是化学蛋白质组学核心技术，以活性位点特异性共价探针为核心，实现复杂生物样本中功能性活性蛋白的原位标记、富集与鉴定。
探针由三部分构成：反应基团（靶向丝氨酸水解酶、半胱氨酸蛋白酶、氧化还原酶等催化中心）、连接臂与报告基团（生物素、荧光基团、炔基/叠氮基）。
核心优势
- 功能导向：仅标记激活态蛋白，不识别无催化活性的失活蛋白或前体
- 原位生理环境：兼容活细胞、组织、体液等复杂体系
- 高精度鉴定：结合 LC-MS/MS 实现高特异性富集与精准鉴定
- 动态范围广：可检测低丰度活性蛋白，灵敏度提升 8–10 倍
标准化流程
- 探针设计与活性验证（IC₅₀ 与母核分子偏差 ≤ 3 倍）
- 原位标记与竞争对照（37℃ 孵育 1–4 h）
- 点击化学富集纯化（Cu(I) 催化 + 链霉亲和素磁珠）
- 胰蛋白酶酶解 + 高分辨 LC-MS/MS 检测（DDA/PRM 模式）
- 生信分析与靶点验证（Western Blot / CETSA / 分子对接）